蓖麻毒素及其异毒素的研究

本文叙述了我国产蓖麻(Ricinus communis L)种子的含毒提取液在CM-纤维素(CM32)柱层析时用含0.1mol/L NaCl、0.05mol/L的磷酸缓冲液(pH6.5)洗脱,分出3个有毒馏份,再经Sepharose 4B和(或)Sephadex G-100柱层析得到3种蓖麻毒素和1种蓖麻凝集素。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,蓖麻凝集素的分子量是125 000 Da,蓖麻毒素a、b和c的分子量分别63 000、63 000和56000Da,对小鼠腹腔注射LD_(50)为11.9、79.0和12.3μg/kg。蓖麻凝集素在0.03μg/ml,4℃放置4h     

海洋药物研究开发漫谈

天然药物研究和应用历史悠久。在药物学发展历史中,植物药应用最早,也最广泛,也是近代药物的主要源生点,全世界的上市药物中约有２５％来源于植物药。４０年代以来,抗生素等微生物来源药物异军突起,成为开发天然药物的新热点,为人类健康做出了重要贡献,但是,随着世界经济与社会发展,人类对健康的要求不断提高,严重影响人类健康的疾病谱也在不断变化,对新药的需求与日俱增,人们依然热切关注植物与微生物等天然药物资源,与此同时,也将寻求新药的希望寄托于开拓新的天然药物领域,７０年代以来,“向海洋要药”成为国际医药界的…     

梭曼对体外培养神经细胞的影响

目的　研究梭曼对体培养神经细胞的直接作用 ,为在细胞水平上构建出评价梭曼毒性和抗毒药物救治效果的模型奠定基础。方法　小鼠神经细胞的体外培养方法 ,乙酰胆碱酯酶 (AChE)活性测定法 ,细胞死亡率及LC50 等。结果　梭曼浓度为 0 .96mg·L- 1时 ,对神经细胞的形态变化无明显影响 ,当梭曼浓度增加到 96 0mg·L- 1时 ,神经细胞形态学发生变化 ,表现为突触收缩 ,细胞收缩、变圆、死亡等。梭曼在 2 4h对神经细胞LC50 值为 2 0 .35mg·L- 1。神经细胞培养液中AChE活性随培养时间的延长 ,AChE活性有显著增加的趋势 (P <0 .0 1) ,而梭曼能显著抑制培养液中AChE活性 (P <0 .0 1)。结论梭曼对体外培养的神经细胞AChE活性的影响与整体动物一致 ,提示该细胞可作为快速评价梭曼细胞损伤及抗毒药物筛选的方法之一     

槲寄生毒素研究进展

槲寄生毒素是药用植物槲寄生中非常重要的抗肿瘤成分之一,是一类相对分子质量在5 000左右的含有46个氨基酸残基的碱性毒性多肽,富含半胱氨酸。这类多肽对多种肿瘤细胞系具有细胞毒活性,并具有免疫调节功效,还有显著的降压、抗心律失常等作用。着重对槲寄生毒素的结构、功能、构效关系等方面的研究结果与进展进行综述。     

加速溶剂萃取-气相色谱/质谱(ASE-GC/MS)法测定近海沉积物中的有机磷农药

目的：建立快速、灵敏的检测近海沉积物中痕量有机磷农药的方法。方法：用加速溶剂萃取仪（ASE）提取近海沉积物中的有机磷农药,用气相色谱-质谱（GC-MS）进行检测,建立了同时测定沉积物中敌敌畏、乐果、久效磷、甲基对硫磷、对硫磷、马拉硫磷、毒死蜱等7种有机磷农药的方法。采用正交实验优化了ASE的萃取条件：用丙酮、二氯甲烷（1：1,V/V）在加速溶剂萃取仪上以10.3 Mpa、120℃提取5 min。结果：近海沉积物中加标有机磷农药的回收率在78.7%-101.5%,检出限为0.43-14.2 ng/g。结论：该方法显著优于传统提取和分析方法。     

含磷毒剂体外药效学评价方法建立

目的 含磷毒剂主要是通过抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)发生毒害作用,本文旨在建立一种在体外快速测定AChE 活性的方法,为有机磷毒剂中毒及解救时AChE活性检测奠定基础。方法 以动物全血红细胞作为AChE的来源,利用硫代乙酰胆碱与巯基显色剂DTNB反应形成黄色化合物的原理,用分光光度法在412 nm处比色定量测定AChE活性。首先利用还原型谷胱甘肽能提供巯基,其显色效应相当于硫代胆碱,故用谷胱甘肽进行DTNB法测定AChE活性标准曲线的绘制;其次进行了DTNB法测定全血样品AChE活性的方法学研究,主要包括对全血进行20, 40和60等不同倍数的稀释后测定AChE活性、使用兔、豚鼠、比格犬及猴等不同动物全血红细胞作为AChE的来源进行AChE活性的测定,同时对不同批次全血样品及同一批次血样不同时间的AChE活性进行测定,验证DTNB法测定AChE活性的方法的可行性;最后选择兔全血红细胞作为AChE的来源,对有机磷毒剂如沙林及梭曼进行了体外药效学评价,梭曼终浓度为6.25 nmol·L^-1～0.4 μmol·L^-1,沙林终浓度为6.25 nmol·L^-1～4 μmol·L^-1,以不同浓度沙林及梭曼的负对数对兔子全血AChE抑制百分率的对数作图,求出沙林及梭曼抑制动物全血AChE的量效曲线,计算得到其IC₅₀值和IC₉₀值。结果 以吸光度值（标准管吸光度值-零管吸光度值）为纵坐标,AChE活性为横坐标作图,即得谷胱甘肽标准曲线,标准曲线方程为Y=0.0029＋0.1218X,r＝0.9999,结果表明,该检测方法在AChE活性为0～10.8 mmol·L^-1的范围内保持线性。选取兔全血40倍稀释后作为AChE的来源进行实验,通过对不同动物批内及批间AChE活性进行测定并统计得出,批内差异为0.44%～0.67%,批间差异为1.03%～2.27%。表明该方法批内及批间差异较小,均不超过10%,可以进行有机磷类化合物的体外药效学评价。不同浓度沙林及梭曼对兔全血AChE活性抑制的量效关系表明其作用强度的顺序为：梭曼＞沙林,该实验结果与文献报道相符合。梭曼对兔全血AChE量效曲线图表明,其量效曲线方程为：Y= 372.69-45.53X,R=-0.9930;梭曼对兔全血AChE活性抑制的IC₅₀值和IC₉₀分别为83 nmol·L^-1和0.62 μmol·L^-1。沙林对兔全血AChE量效曲线图表明,其量效曲线方程为：Y= 284.45-3905X,R=-0.9679;沙林对兔全血AChE活性抑制的IC₅₀值和IC₉₀分别为1.2 μmol·L^-1和15 μmol·L^-1。结论 该方法能够快速测定不同动物全血红细胞AChE的活性,实验结果可靠,重现性好,可用于多种有机磷毒剂体外药效学评价。由于红细胞中AChE全部存在于细胞膜表面,因此,本测定方法不需将红细胞溶解就能够直接测定AChE活性,能够减少制备酶原的过程,适于快速完成体外AChE活性的分析测定。     

α2A-肾上腺素受体重组细胞株信号转导活性

目的 α₂-肾上腺素受体(α₂-ARs)是G蛋白偶联受体超家族中成员之一,α₂-ARs在人体多种生理活动中发挥着极其重要的作用,介导低血压、镇静、催眠、镇痛、麻醉等多种重要的生理应答和药理学效应,其相关配体在医学治疗领域中具有很大潜力。本研究旨在建立以α_2A-AR亚型为作用靶点的高选择性药物筛选平台,为该类药物的活性评价提供新研究方法。方法 对大鼠脑α_2A-AR进行基因克隆和CHO真核细胞表达,获得阳性重组单克隆细胞株。（1）阳性重组CHO-K1细胞准备：取冻存阳性重组CHO-K1单克隆细胞株及转染空质粒的细胞株复苏,用筛选培养基培养并传代。（2）cAMP浓度标准工作曲线制备：配制cAMP浓度系列分别为0, 0.195, 0.78, 3.1, 12.5, 50和200 pmol·ml^-1（B0~B6）,同时设非特异管（NSB）和空白对照管（N）,酶联免疫法检测各管A₄₅₀值,以浓度为0的A₄₅₀值减去NSB的A₄₅₀值为B0,其余各浓度A₄₅₀值减去NSB的A₄₅₀值为B值,以B/B0(%)作为纵坐标,以标准cAMP浓度的常用对数值为横坐标,列出线性回归方程。（3）重组表达受体与激动剂结合后介导胞内cAMP信号反应检测：将培养的8个重组阳性细胞株与1个重组阴性细胞株按5×10⁸ L^-1分别接种至96孔板,每孔100 μl,37℃5％CO₂培养过夜;每孔加入肾上腺素8 μmol·L^-1作为激动剂,37℃5％CO₂培养30 min;去掉细胞培养液并用生理盐水洗涤,加入盐酸0.1 mol·L^-1作为细胞溶解液,室温下振摇10~20 min以使细胞充分溶解,将细胞溶解样品转入96孔酶联检测板,进行酶联免疫检测胞内cAMP的含量变化情况。结果 （1）阳性重组CHO-K1细胞复苏后,在筛选培养基中生长状况良好,表明α_2A-AR在CHO-K1细胞中稳定表达。（2）cAMP浓度测定标准工作曲线制备：以标准cAMP浓度的常用对数值为横坐标,以B/B0(%)作为纵坐标作图得到一条近似直线,线性回归方程为B/B0(%)＝-27.6 lg［cAMP］＋89.8,r＝-0.9776,P<0.01。（3）重组表达受体与激动剂结合后介导胞内cAMP信号反应检测：8个重组阳性细胞株与1个重组阴性细胞株,在激动剂处理前后,细胞内A₄₅₀变化情况为：重组阴性细胞株cAMP水平无明显变化;8个重组阳性细胞株cAMP水平变化并不一致,其中,5株重组阳性细胞株cAMP水平未见明显变化;2株重组阳性细胞株cAMP水平下调,加入肾上腺素激动剂后的cAMP含量分别为加入肾上腺素激动剂前的74.7％, 59.6%;1株重组阳性细胞株cAMP水平明显下调,加入肾上腺素激动剂后的cAMP含量为加入肾上腺素激动剂前的1.47%。结论 8个α_2A-AR受体重组阳性细胞株对肾上腺素激动剂的信号转导反应存在有较大差异。野生型CHO细胞本身不表达α_2A-AR受体,人为导入α_2A-AR受体基因,重组受体的信号转导活性存在差异,可能是由诸多不确定因素造成的,诸如：细胞自身的活性状态及质粒进入细胞后的整合状态差异;α_2A-AR在不同细胞株的表达水平差异;α_2A-AR受体表达过程中的修饰加工差异以及真核细胞其他相对复杂的表达调控环节差异等。     

相思子蛋白P2小鼠灌胃给药后的组织分布

目的 相思子蛋白P₂（abrin P₂）是由豆科藤本植物相思（Abrus Precatorius）种子中分离纯化出的一种植物蛋白毒素,对于多数肿瘤具有显著的杀伤作用。但由于其为蛋白类毒素,易产生抗体,从而降低抗癌效果;且其自身具有较大的毒性,注射途径多次给药较难控制给药剂量。为了降低abrin P₂对机体的毒性和免疫原性,同时也为了避免注射给药产生的一些弊病,对abrin P₂灌胃给药后在小鼠体内的组织分布进行了研究。方法 本文采用同位素示踪法结合三氯乙酸沉淀法对abrin P₂在小鼠各组织匀浆中的回收率和稳定性进行了研究。并采用单次ig给予abrin P₂ 43.8和170.0 μg·kg^-1后,分别测定组织中abrin P₂及代谢物总含量（abrin P₂T）、TCA沉淀部分的abrin P₂含量（代表大部分原型药物,abrin P₂P）,为abrin P₂新型抗肿瘤药的研发及临床治疗提供参考依据。结果 abrin P₂在小鼠各组织匀浆中的回收率均大于80%,abrin P₂在肝、肾、骨骼肌中,于25℃和4℃放置6 h基本不变。小鼠分别ig给予abrin P₂ 43.8和170.0 μg·kg^-1后组织分布研究表明,小鼠灌胃给予43.8 μg·kg^-1时,abrin P₂T和abrin P₂P在各组织中的含量,除消化系统外,脾、肺、肾、子宫中相对较高,其他组织中含量相对较少,脑中最少。小鼠ig给予abrin P₂ 170.0 μg·kg^-1后,除消化系统外,abrin P₂T和abrin P₂P含量较多的组织分别为子宫、肾,心、肺、脾,其中abrin P₂T在心中含量较多,而abrin P₂P在肺中含量较多。总体来说,给药后1~3 h内,abrin P₂T的含量在多数组织中达到顶峰,之后迅速下降,18 h后下降平缓,大部分组织在72 h仍可检测到少量abrin P₂T的存在。在abrin P₂P中,大多数组织在1~3 h内abrin P₂P的含量达到顶峰,之后迅速下降,在9 h内逐渐平缓,24 h后,在大多数组织中已经检测不到abrin P₂P的存在。结论 abrin P₂分布的靶向组织可能是脾、子宫和肾。脑中abrin P₂P和abrin P₂T分布最少,表明,abrin P₂不易通过血脑屏障。小鼠ig给予abrin P₂P和abrin P₂T在各组织中不同时间段含量的差异表明,abrin P₂进入体内后,体内各种因素会导致其大量的分解。ig给予abrin P₂ 43.8和170 μg·kg^-1,在各组织中的分布不尽相同,提示,abrin P₂在治疗靶器官的肿瘤上可能会更加有效,在治疗不同器官肿瘤时,可选择不同的给药剂量。     

抗辐射生物药物的研究进展

核能与核技术的应用给人类带来巨大便利的同时,也大大增加了人们遭受辐射损伤的潜在性风险。抗辐射药物可减少电离辐射损伤引起的发病率和死亡率,长期以来人们致力于抗辐射药物的研究与开发,关于低毒性和保护效果好的辐射防护剂研究倍受关注,并且筛选出了一批具有良好抗辐射作用的候选药物。其中,生物制品类抗辐射药物作为急性辐射综合征预防或治疗药物展现了良好的应用前景,本文主要对近年来进展较快的生物制品类抗辐射药物的研究现状进行综述。     

~(125)I-相思子毒素P_2在小鼠体内的血药浓度及其生物利用度

目的研究相思子毒素P2(abrinP2)在小鼠体内的血药浓度和生物利用度,为发展相思子毒素新型抗癌药打下基础。方法 ICR小鼠静脉(2.1μg.kg-1)和灌胃(87.5、43.8和21.9μg.kg-1)给予125I-相思子毒素P2(125I-abrinP2)。给药后不同时间内取血,分离血浆,用同位素示踪法检测血浆中的放射性;然后采用三氯乙酸(TCA)沉淀法检测沉淀中的放射性,PKS软件分析房室模型和计算各种参数,并根据灌胃和静脉给药的药-时曲线下面积(AUC0～∞)之比计算绝对生物利用度。结果相思子毒素P2在0.01～50μg.L-1浓度范围内线性关系良好,样品在血浆中的回收率大于85%,日内变异系数(RSD)小于5%。小鼠单次静脉注射2.1μg.kg-1相思子毒素P2的药代动力学参数分别为吸收半衰期(T12Ka)0.46h、消除半衰期(T21Ke)8.63h、药-时曲线下面积(AUC0～∞)为16.84μg.h.L-1;小鼠单次灌胃给予剂量分别为21.9、43.8、87.5μg.kg-1的125I-abrinP2后,吸收半衰期分别为1.26、1.15、0.55h;消除半衰期分别为46.21、46.21、46.19h,AUC0～∞分别为41.42、67.17、119.27μg.h.L-1。结论相思子毒素P2的血药浓度数据拟合为二室模型,在低、中给药剂量范围内符合线性动力学规律。低、中、高剂量灌胃给药的绝对生物利用度分别为24.6%、19.5%、16.7%。